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熒光定量PCR的凍干(一)

更新時(shí)間:2020-04-28 點(diǎn)擊次數(shù):3125

熒光定量PCR和普通PCR相比由于具有很多優(yōu)點(diǎn),所以目前對(duì)熒光pcr的研究很火。熒光PCR的優(yōu)點(diǎn)包括:1、可以高靈敏檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞。2、高特異性和精確性 ,將DNA雜交的高特異性和光譜技術(shù)的高精準(zhǔn)性融合,應(yīng)用熒光探針和光電傳導(dǎo),直接探測(cè)基因擴(kuò)增過(guò)程中熒光信號(hào)的變化,以獲得定量結(jié)果,相當(dāng)于在PCR反應(yīng)過(guò)程中自道動(dòng)完成了Northern雜交;3、操作版簡(jiǎn)便、速度快 。通過(guò)計(jì)算機(jī)和分析軟件實(shí)現(xiàn)PCR擴(kuò)增、產(chǎn)物檢測(cè)和定量分析一體化;4、安全、無(wú)污染。 FQ-PCR在全封閉狀態(tài)下進(jìn)行PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物分析,杜絕了傳統(tǒng)PCR開(kāi)放檢測(cè)對(duì)環(huán)境的污染和由此導(dǎo)致的假權(quán)陽(yáng)性;5、結(jié)果觀測(cè)重復(fù)性好。 一起在線實(shí)時(shí)觀測(cè),結(jié)果判斷直觀,避免人為因素干擾。

熒光定量PCR雖然具有很多優(yōu)點(diǎn),但是熒光定量PCR擴(kuò)增反應(yīng)試劑在保存、運(yùn)輸和使用過(guò)程中要求在低溫條件下進(jìn)行,否則診斷試劑容易失效,因此試劑盒的長(zhǎng)期保存和長(zhǎng)途運(yùn)輸將會(huì)受到很大的限制,容易因診斷試劑保存溫度不當(dāng)而使其敏感性下降甚至*失效,終導(dǎo)致疫病的檢測(cè)不及時(shí)而造成疫病流行。目前,針對(duì)核酸擴(kuò)增反應(yīng)試劑缺少能在4℃或室溫長(zhǎng)期保存的方法。因而凍干法逐步應(yīng)用在熒光定量PCR試劑上。

冷凍干燥是把試劑預(yù)*行降溫凍結(jié)成固體,然后在真空條件下升華,將95%以 上的水分蒸發(fā)掉,而保護(hù)劑作為固劑在升華時(shí)不會(huì)崩塌,保證了凍干制品的形態(tài)。整個(gè)過(guò)程 在低溫中進(jìn)行,試劑活性不會(huì)受到影響。凍干試劑有著常溫穩(wěn)定、擺脫冷鏈、即時(shí)活化、不相容試劑共存、無(wú)交叉污染等很多明顯優(yōu)勢(shì),隨著產(chǎn)業(yè)的升級(jí),越來(lái)越多廠家嘗試開(kāi)發(fā)凍干試劑。國(guó)內(nèi)對(duì)于凍干技術(shù)研究的累積相對(duì)較少,從學(xué)術(shù)到人才,都使得凍干技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中有較難逾越的壁壘。實(shí)際上絕大部分的試劑都可以做成凍干的,他的風(fēng)險(xiǎn)并不是試劑本身,而是錯(cuò)誤的方法和巨大的時(shí)間成本。

熒光定量PCR是可以實(shí)現(xiàn)凍干的。已經(jīng)有很多公司生產(chǎn)了凍干型PCR試劑,如犬細(xì)小病毒(CPV)核酸檢測(cè)試劑盒(凍干型/PCR-熒光探針?lè)ǎ?、All-Ready 熒光定量RT-PCR試劑(凍干)、水痘RT-帶狀皰疹病毒野生株探針?lè)晒舛縋CR試劑盒等。而國(guó)內(nèi)IVD企業(yè)廣東華銀醫(yī)藥科技有限公司推出全組份凍干的“xin型guan狀病毒2019-nCoV核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)。從目前來(lái)看基本上大部分診斷試劑都是可以通過(guò)凍干法獲得凍干試劑盒的。我公司提供凍干機(jī)和凍干技術(shù)支持,全力支持熒光定量PCR試劑的凍干項(xiàng)目。

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